|
实验题目：单克隆抗体的制备
教 师：XXX
实验类型：综合
学 ∈?/strong>：16 (参考)
内 容：
一、实验目的：
单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。
二、实验原理：
骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养基[含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中进行选择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡；未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，因此能在HAT培养基中存活和增殖。经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养，即可无限制地大量制备单克隆抗体。
三、试剂与器材：
细胞培养板、解剖器械、平皿、酶标仪、加样器、细胞计数板、CO2培养箱、倒置显微镜等。
四、操作方法：
1、抗原制备；
2、免疫动物；
3、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；
4、细胞融合；
5、杂交瘤细胞的选择培养；
6、杂交瘤细胞的筛选；
7、杂交瘤细胞的克隆化；
8、单克隆抗体的检定；
9、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；
10、单克隆抗体的大量制备。
五、关键步骤与注意事项：
1、整个制备过程需严格无菌
2、细胞传代培养时注意适时更换培养液
六、思考题：
1、单克隆抗体用什么进行鉴定？注意事项有那些？
2、杂交瘤细胞培养过程中有哪些注意事项？ 3、单克隆抗体和多克隆抗体有何异同？
上一篇：免疫印迹（Western blotting） 下一篇：实时荧光定量PCR原理
|
