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流式细胞仪实验方法
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日期：2007-02-25 13:20:16
点击：351 评论：0
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| 一、 实验准备 1． 标本制备： 2． 最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3 |
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原位杂交操作规程
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日期：2007-02-15 09:35:37
点击：74 评论：0
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| （一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml，NaCl 5g，浓HCl 4ml，H20 定容0.98L，醋酸酐 （用前加）2.5ml。20 |
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菌落PCR，快速鉴定重组质粒
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日期：2007-02-11 01:19:52
点击：280 评论：0
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| 质粒快速鉴定 试剂： Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M 50mM NaCl 0.1ml/5.0M 20% Sucrose 5ml/40% 50 g/ml RNAseI 50ul/10mg/ml 50 g/ml lysozyme 50ul/10mg/ml 补水至 10ml，-20℃分装保存。 Lysis buffer: 89mM Tris-HC |
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Yeast Colony PCR--酵母菌落PCR
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日期：2007-02-11 01:17:56
点击：175 评论：0
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| This method is more reliable than the old method of adding yeast directly to PCR tubes. No more than 1 microliter of the crude DNA should be added to the 50 microliter PCR reaction because the SDS in the DNA prep can inhibit the PCR reaction. Note: T |
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Colony PCR--菌落PCR
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日期：2007-02-11 01:14:38
点击：164 评论：0
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| This procedure will work for both yeast and E. coli: Take a small colony and suspend it in 5ul of H2O in a PCR tube. Heat for 5 min at 95C and then spin the condensation down in a microfuge. Set up the PCR reaction as follows: 5ul H2O + cells 5ul 5uM |
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Probing and Stripping of Western Blot
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日期：2007-02-11 00:56:33
点击：102 评论：0
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| Western Blot Probing by ECL 1. After electroblotting of protein gel to immobilon membrane (See Novex NuPAGE method ), mark the side of the membrane not in contact with the gel with permanent ink and cut a small corner piece off the bottom of the mem |
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RNAi常见问题及问答
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日期：2007-02-04 14:45:33
点击：140 评论：0
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| 有关Stealth RNAi的问题 什么是Stealth RNAi？ Stealth RNAi是RNAi化学的新一代产品。Stealth RNAi分子是经过专利化学修饰的、钝末端、双链25聚体（25mer）。这些化学修饰专门用来消除诱导的细胞应激反应。它也使Stealth RNAi比标准的siRNA在血清中更稳定，通过确保Ste |
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siRNA的制备方法介绍
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日期：2007-02-04 14:26:01
点击：121 评论：0
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| 体外制备 1.化学合成 许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学 |
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siRNA的转染方法
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日期：2007-02-04 14:24:04
点击：115 评论：0
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| 将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质 |
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RNAi制备siRNAs的方法
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日期：2007-02-04 14:17:04
点击：104 评论：0
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| 越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。 RNAi 的应用包括 |
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RNAi技术的应用
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日期：2007-02-04 14:15:46
点击：119 评论：0
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| 5 RNAi 技术的应用 5.1 功能 基因组 和遗传学应用 随着各种模式生物和人类 基因组 测序的完成，基因功能的研究远远落后于大量序列所提供的信息，研究和发现基因功能成为越来越紧迫的任务。长期以来，破坏基因结构或抑制基因表达是研究基因功能的重要方法，如常用的基因 |
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高效感受态细胞制作
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日期：2007-01-26 10:42:51
点击：136 评论：0
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| 方法一 A 液： 1M ， MnCl 2 ： B 液： 1M ， HEPES ， pH=6.2-6.8 ，用无菌水配，配后不需灭菌； C 液 称取 CaCl 2 0.10g ， KCl 1.18g ，全部转入细口试剂瓶，然后加入 46ml 三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅 12 |
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基因转染和实验设计原则
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日期：2007-01-26 09:03:15
点击：140 评论：0
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| 磷酸钙-DNA共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导 |
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基因敲除技术
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日期：2007-01-25 12:47:54
点击：1064 评论：0
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| 1．概述： 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了 |
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分子生物学实验基本数据
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日期：2007-01-19 10:56:01
点击：165 评论：0
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| Units 1 mg = 10-3 g 1 ug = 10-6 g 1 ng = 10-9 g 1 pg = 10-12 g 1 kb of double stranded DNA = 660 kD 1 kb of single stranded DNA = 330 kD 1 kb of single stranded RNA = 340 kD Average MW of a deoxynucleotide base = 324.5 Daltons Average MW of a deoxyn |
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