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细胞增殖的检验方法:酸性磷酸酶法
  日期:2007-02-20 13:43:52 点击:133 评论:0
酸性磷酸酶法 1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。 2.去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。 3.37℃,孵育1~4h。 4.加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。 5.在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度,将细胞培养板其
细胞增殖的检验方法:结晶紫法
  日期:2007-02-20 13:41:25 点击:118 评论:0
结晶紫法 1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。 2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。 3.置空气或烘箱37℃彻底干燥。 4.加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。 5.用蒸馏水洗涤,至多余的结晶紫液冲洗干净。 6
细胞增殖的检验方法:BrdU标记法
  日期:2007-02-20 13:37:22 点击:274 评论:0
BrdU 标记法 1.细胞以1.5×10 5 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G 0 期。 2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。 3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。 4.
巨噬细胞的分离和纯化
  日期:2007-02-20 13:23:46 点击:209 评论:0
巨噬细胞的分离 1 )从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞 1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。 2.如要收集
肿瘤细胞培养方法简介
  日期:2007-02-16 10:40:30 点击:77 评论:0
一、机械刮除法 1.标记:镜下观察,用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。 2.刮除:弃掉培养液,把无菌胶刮伸入瓶皿中,肉眼或显微镜窥视下,刮除无标记空间。 3.用Hanks液冲洗一两次,洗除被刮掉的细胞。 4.注入培养液继续培养,如发现仍有成纤维细
激光显微细胞分离技术
  日期:2007-02-11 00:19:45 点击:130 评论:0
在基础医学研究中涉及越来越多的如某一疾病状态组织中,多种基因或遗传变化,区别发展中的组织细胞群以及疾病状态组织细胞,将有助于了解疾病发生的分子机制。因此,在下一代的分子分析方法将需要进入微观世界及自动化程度高。对某一特殊个体的切片进行遗传指纹图谱鉴定
肿瘤细胞培养方法简介
  日期:2007-02-11 00:02:44 点击:109 评论:0
一、机械刮除法 1.标记:镜下观察,用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。 2.刮除:弃掉培养液,把无菌胶刮伸入瓶皿中,肉眼或显微镜窥视下,刮除无标记空间。 3.用Hanks液冲洗一两次,洗除被刮掉的细胞。 4.注入培养液继续培养,如发现仍有成纤维细
核糖核酸干扰技术(RNAi技术)介绍
  日期:2007-02-04 14:12:43 点击:138 评论:0
核糖核酸干扰技术( RNAi 技术)介绍 转录后基因沉默(PTGS, post- transcriptional gene silencing)-最初被认为仅限于矮牵牛花和其它一些植物中的奇异现象,是目前分子生物学研究中一个最热门的话题。过去几年中,科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植
细胞凋亡--细胞凋亡检测技术与方法
  日期:2007-02-01 01:33:37 点击:110 评论:0
细胞凋亡 细胞凋亡是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用;它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境
细胞培养基应用选择
  日期:2007-01-28 14:32:46 点击:163 评论:0
选择培养基没有一定的标准,有几点建议可供参考: (1 )建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要
细胞凋亡的形态学检测
  日期:2007-01-20 09:02:00 点击:126 评论:0
根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变?⒈湫危赴ね暾鱿址⑴菹窒螅赴蛲鐾砥诳杉蛲鲂√濉?贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 (2) 染色细胞:常用
MTT Cell Proliferation Assay
  日期:2007-01-18 11:57:41 点击:233 评论:0
MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay, first described by Mosmann in 1983, is based on the ability of a mitochondrial dehydrogenase enzyme from viable cells to cleave the tetrazolium rings of the pale yellow MTT an
细胞活力测定技术
  日期:2007-01-18 11:43:57 点击:196 评论:0
用途 在荧光显微镜下可观察到产生荧光的细胞。表明是有活力的;相反,不产生荧光的细胞,表明是无力的。 本法利用活原生质体有选择吸收外界的特性,用染料处理时,活原生质体不吸收染料,细胞未染上颜色,而死细胞立即吸附大量染料而染上颜色。 (一)荧光法 操作步骤 荧
细胞重量测定技术
  日期:2007-01-18 11:23:18 点击:104 评论:0
操作步骤 (一) 鲜重 1. 在琼脂固体培养基上生长的细胞材料,可以采用取出细胞材料,洗去琼脂培养基,用滤纸吸干水分,再直接称取重量的方法。 2. 液体悬浮培养材料,可放在已知重量的尼龙丝网上过滤。并用水洗除培养基,进行抽滤以除去细胞沾着的水滴,再称重。 (
染色技术
  日期:2007-01-18 11:16:20 点击:160 评论:0
由于微生物细胞含有大量水分(一般在80-90%以上),对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大,与周围背景没有明显的明暗差。所以,除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外,绝大多数情况下都必须经过染色后,才能在显微镜下进行观察。但是,任何一项技术都不是完
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