PCR应用

当前位置：主页>核酸技术> 正文

PCR应用

文章来源：文章作者：发布时间：2007-02-07 字体： [大中小]

多重PCR

在多重PCR中，同时使用多对引物扩增几个不同的位点。这种复杂的PCR一般会导致低产量，而且需要高浓度的Mg2+。如果没有正确优化，容易出现假阳性。Platinum Taq DNA聚合酶经改良，可以适应广谱浓度的Mg2+，从而提高多组反应成功的可能性（图27）。

查看大图

图27. 对于多重PCR，Platinum® Taq DNA聚合酶提供了更好的灵敏度

使用Taq DNA聚合（A组）酶或Platinum Taq DNA聚合酶（B组），利用5个不同的引物对，从人基因组DNA对dystrophin基因进行多重PCR。使用所示引物和模板浓度，从人基因组DNA中得到268bp到547bp范围的扩增产物。

使用双核苷重复标记物确定基因型

确定扩增的双核苷重复区域的大小较难，因为Taq DNA聚合酶经常在PCR产物中加入非模板核苷。在扩增反应中包含一个多余核苷的产物部分决定于序列和引物，并且差异很大。但Platinum GenoTYPE Tsp DNA聚合酶表现出最小的非模板核苷掺入，有助于增加等位基因长度决定的精确度（图28），仅需要用Platinum GenoTYPE Tsp DNA聚合酶替换在这些反应中所使用的Taq DNA 聚合酶就可以。

查看大图

图28. DNA聚合酶对双核苷重复标记进行基因定型的比较

使用Taq DNA聚合酶或Platinum GenoTYPE DNA聚合酶对拟南芥nga 106位点的扩增结果

检查多态性的工具

AFLP技术是一种用来对植物和微生物基因组DNA进行指纹分析的技术（图29）。RFLP、AP-PCR和RAPD也是同样的DNA指纹分析技术。RFLP是一种基于杂交的技术，其费时费力并需要大量基因组DNA。AP-PCR和RAPD是较快的，基于PCR的方法，但是都对反应条件很敏感，从而影响可重复性。

图29. AFLP分析系统图解

查看大图

AFLP技术结合了RFLP的可信性和基于PCR的指纹分析技术的简便性，从而使其成为一种易于获取信箱的方法。用AFLP技术得到的指纹分析可以作为鉴定DNA样品或分析样品间相似性的工具（图30）。

查看大图

图30. 典型的AFLP指纹分析

使用AFLP系统Ⅰ和EcoRⅠ+ACC及Mse+CAA选择性引物对大豆生态型多态性进行分析。泳道1到9分别为生态型：Holladay; Morgan; Hytest; Essex; Bass; T135; P88; P188788; P83; P183495; P90; P190763。

很多参数会影响AFLP的结果，包括引物中选择性核苷的数目。当选择性核苷增加时，扩增条带的数目就会减少。较大的基因组需要较多的选择性核苷，以扩增恰当数量的DNA，因为酶切较大的基因组DNA会得到更多的限制性酶切片段。

模板质量也会影响AFLP结果。模板质量差会抑制限制性内切酶，从而导致不完全酶切而在凝胶上看到很少的扩增条带。AFLP可以适应模板浓度的变化，使用100ng到5μg的DNA之间观察不到差异。

高产量，特异和灵活的定量PCR试剂体系

Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG（qPCR）同竞争对手的定量PCR体系相比提供了更优异的结果。使用这种产品，您可以在您的PCR中得到更好特异性和更高的灵敏度，同时可以灵活地选择您所喜欢的扩增条件，检测方法和设备。

实时定量PCR是快速增长的PCR方法，它可以精确、可重复地定量起始物质。Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG是一种方便使用的反应混合液，为定量分析进行了优化。它包含了PCR所必须的成分（如缓冲液，核苷酸，聚合酶）。只需加入您的模板，扩增引物和荧光标记探针。您就可以得到实时qPCR所需的特异性和灵活性。

高产量和特异性的扩增

Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG提供了强大的PCR扩增，可以使用多个模板组。所使用的Platium® Taq DNA聚合酶具有抗体介导的热启动特性。这极大地降低和消除了错误配对和非特异性扩增，使您得到较高产量，并增加特异性。整合的UDG（尿苷酸DNA糖基化酶）防止残余污染的能力防止了非模板DNA的扩增，从而降低了假阳性，使结果更可靠

超越竞争者

在产量和灵敏度方面，Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG都超越了竞争对手。在ABI Prism® 7700上，Platium® SuperMix-UDG比Universal MasterMix的灵敏度高2Ct（阈循环）。您可以更精确地定量低拷贝的基因，并在较宽的目的浓度范围内检测线性剂量反应（图31）。

查看大图

图31. 使用Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG得到更高的产量和灵敏度

利用竞争对手的Unviersal PCR Master Mix（蓝点）或Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG（红点），使用200nM的各种引物和100nM TaqMan®探针对人类基因组DNA（1pg-1μg）扩增。在室温下配制反应体系。在50℃进行UDG保温2min。PCR反应在95℃ 10min，50℃ 2min，然后95℃ 15s和60℃ 1min进行50个循环。

高度灵活性

除了灵敏度和特异性外，Platium® Quantitative PCR SuperMix-UDG在分析设置，检测方法和设备上给你提供了较高的自由度。使用Platium® SuperMix-UDG，您可以：

对扩增的不同模板优化镁离子浓度，由于提供了附加的氯化镁，所以您可以方便地配置SuperMix体系。

可以在多种设备上使用，如ABI Prism® 7700, ABI GeneAmp® 5700和Bio-Rad的I-Cycler。

可以利用多种检测方法的优点，包括TaqMan®探针和Molecular Beacon，您不必局限于特定的试剂盒。

上一篇：其他需要考虑的事情下一篇：PCR产物克隆

↑返回顶部打印本页关闭窗口↓

用户名：（新注册）密码：匿名评论 [所有评论]

评论内容：(不能超过250字，需审核后才会公布，请自觉遵守互联网相关政策法规。

§最新评论：

	推荐文章
·菌落原位杂交（colony in situ h

	热点文章
·Rt-PCR实验步骤 ·推荐：PCR实验技术指南 ·聚合酶链反应[PCR] ·琼脂糖凝胶电泳回收PCR产 ·影响PCR的主要因素 ·免疫荧光技术 ·Southern杂交 ·推荐：PCR产物的直接测序

	相关文章
·其他需要考虑的事情 ·PCR产物克隆 ·提高忠实性 ·PCR扩增产物表达的快速方 ·增加PCR灵敏度 ·疑难解答 ·增加PCR特异性 ·相关产品