|
 |
Screen ES cells by Southern Blot
|
| |
日期：2007-12-02 13:26:12
点击：28 评论：0
|
| Digest DNA in 96-well plate To each well add: 4ul 10Xbuffer 4ul Enzyme 0.4ul Spermidine(0.4M) 31.6ul H 2 O 37C 19h, then add 4ul loading dye to each well. Load into 400ml 1% agarose gel immediately or keep the plate at -20C. Southern Blot 1) Take pi |
|
|
基因诊断原理
|
| |
日期：2007-11-27 10:06:05
点击：82 评论：0
|
| 基因诊断(gene diagnosis)又称DNA诊断，是利用DNA重组技术，直接从DNA水平来检测人类疾病的新的诊断手段，是以探测基因的存在，分析基因的类型和缺陷及其表达功能是否正常，从而达到诊断疾病的一种方法。是继形态学、生物化学和免疫这诊断之后的第四代诊断技术，它的诞 |
|
|
基因诊断技术方法分类
|
| |
日期：2007-11-27 10:03:45
点击：104 评论：0
|
| （1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型 |
|
|
基因诊断技术的选择
|
| |
日期：2007-11-27 10:02:45
点击：75 评论：0
|
| 关于如何选择基因诊断技术有两层含义：第一，什么情况下选择基因诊断；第二，如果选择了基因诊断，应当采用哪一种基因诊断技术。以下分别介绍。 1．选择基因诊断的依据。 1）基因诊断可以弥补免疫学检测技术的缺陷 免疫学诊断主要依赖于抗原抗体反应，应用于临床只能在 |
|
|
基因诊断技术的质控指标
|
| |
日期：2007-11-27 09:58:10
点击：45 评论：0
|
| 临床医生了解基因诊断质控指标的含义，对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。 1．灵敏度 简单地说，灵敏度就是检测的最小值。一般来说，我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地，病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒 |
|
|
体外转录合成单链RNA探针
|
| |
日期：2007-11-07 01:35:53
点击：80 评论：0
|
| 体外转录合成单链RNA探针 1.用适当的限制酶消化超螺旋质粒DNA制备5 pmol的线性模板DNA。取一小份消化的DNA（100ng）进行琼脂糖凝胶电泳分析。如有必要，再补加限制性酶进行温育，直至不再残存痕量的未消化DNA。 2.如必须用产生3’突出端的限制酶如P st I 或 Sst I，则 |
|
|
动物组织mRNA的提取
|
| |
日期：2007-11-07 01:32:08
点击：84 评论：0
|
| 与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNA。在构建cDNA文库时， 必须经纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A) |
|
|
mRNA的分离与纯化
|
| |
日期：2007-11-07 01:28:22
点击：64 评论：0
|
| 真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚 |
|
|
一些特殊组织的RNA提取
|
| |
日期：2007-11-07 01:26:16
点击：62 评论：0
|
| 1、 纤维组织： 心脏/骨骼肌等纤维组织提取RNA的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，单位重量的组织RNA的含量就少，建议用尽可能多的起始量。使用TRNzol法可以提取纤维组织终RNA，由于纤维组织终RNA含量较少，可按照增加的起始量成比例增加TRNzol的用量，并在 |
|
|
病毒RNA提取方法
|
| |
日期：2007-11-07 01:25:02
点击：81 评论：0
|
| 实验步骤： 1、 取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管。' @0 b' w# @( b% z: l9 P" k2 | 2、 加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀。 3、 13000rpm离心15min。 4、 在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400 |
|
|
真菌菌丝的总RNA的提取
|
| |
日期：2007-11-07 01:23:27
点击：73 评论：0
|
| 1、 RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RN |
|
|
组织和细胞RNA的制备
|
| |
日期：2007-11-07 01:21:35
点击：68 评论：0
|
| 一、 组织和细胞总RNA提取： 异硫氰酸胍法 （一）试剂准备 1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。 2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保 |
|
|
真核细胞DNA的制备与定量
|
| |
日期：2007-11-07 01:20:42
点击：59 评论：0
|
| 制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基� Ｒ话阏婧讼赴蜃镈NA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存 |
|
|
质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
|
| |
日期：2007-11-07 01:18:19
点击：93 评论：0
|
| 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通 |
|
|
常见问题分析与对策
|
| |
日期：2007-10-26 03:02:38
点击：63 评论：0
|
| PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板： |
|
|
 |
|
本月热点文章 |
|
|
| |
|
|
本月推荐文章 |
|
|
| |
|
|
相关分类 |
|
|
|
|
|
