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实验二十六 植物体色素及其性质
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发布时间：2006-12-05
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一 实验原理：
叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可用丙酮将它们从叶片中提取出来。
叶绿素是一种双羧酸的酯，可与碱发生皂化作用，产生的盐能溶于水，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光镜检查或用分光光度计精确测定；叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光；叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快；叶绿素中的镁可被H+取代而成褐色的去镁叶绿素；加入铜盐作用，后者则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色植物的浸渍标本。
二 操作步骤：
叶绿体色素的理化性质
色素的提取：称取新鲜叶片2 g，放入研钵中加丙酮5 ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮5 ml洗，以漏斗过滤之，即为色素提取液。放于暗处备用。
1) 叶绿素的荧光现象：取上述色素丙酮提取液少许于试管中，分别观察在反射光和透射光一侧，提取液的颜色有无不同。反射光侧观察到的血红色，即为叶绿素产生的荧光颜色。
2) 光对叶绿素的破坏作用：取上述色素丙酮提取液少许分装于2支试管中，1支试管放在黑暗处(或用黑纸包裹)，另一支试管放在强光下，经2－3 h后，观察两支试管中溶液的颜色有何不同。
3) 铜代反应：取上述色素丙酮提取液少许于试管中，1滴1滴加浓盐酸，直至溶液出现褐绿色，此时叶绿素分子已遭破坏，形成去镁叶绿素。然后加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液，则又产生鲜亮的绿色。此即形成了铜代叶绿素。
4) 黄色素与绿色素的分离：称取新鲜叶片2 g，放入研钵中加丙酮5 ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮15 ml洗，以漏斗过滤之，即为色素提取液。加到盛有20 ml乙醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿漏斗边缘加入30 ml蒸馏水，轻轻摇动分液漏斗，静止10分钟，溶液即分为两层。色素已全部转入上层乙醚中，弃去下层丙酮和水，再用蒸馏水冲洗乙醚溶液1－2次。然后于色素乙醚溶液中加入8ml 30％KOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗约5分钟，静置约10 min，再加蒸馏水约10 ml，摇动后静置分离，则得到黄色素层和绿色素层，分别保存于试管中。
5) 观察色素溶液的吸收光谱：
(1)调节分光计，观察电灯光的光谱；
(2)观察色素丙酮提取液，用丙酮将溶液稀释1倍比较之；
(3)观察黄色素乙醚溶液，用乙醚将溶液稀释1倍比较之；
(4)观察皂化叶绿素甲醇溶液，用甲醇将溶液稀释1倍比较之；
(5)观察被光破坏的色素丙酮溶液，试与(2) 作比较；
(6)观察铜代叶绿素溶液。
【注意事项】
提取得到的叶绿体色素先观察是否有血红色的荧光，如无荧光或荧光很弱，则表明提取不够完全，残渣加少许丙酮再研磨提取。
三 作业：
1．提取叶绿素时为什么要加入少量CaCO3 ?加多了会出现什么问题？
2．铜在叶绿素中取代镁的作用，有何实用意义
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