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一 原理: 1.当需要了解细胞悬液中的细胞密度时,通常采用细胞计数法。利用血细胞计数板,可以计算出每毫升溶液中的细胞数。血细胞计数板的四个角上各有一个大格,每一大格由16个方格组成。计数公式为:(点击展开) 2.利用染色法,判断细胞的死活 活细胞的细胞膜具有选择通透性,不能被台盼蓝染色,所以活细胞是透明的。当细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,使其着色,借此可以鉴别死细胞和活细胞。
二 实验材料: 干酵母
三 实验器材: 显微镜、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、吸管
四 试剂: 0.85%NaCl溶液,0.4%台盼蓝染液
五 操作步骤: 1.取一副血细胞计数板,用布将玻片擦干净,把血盖片盖在血细胞计数板的槽上,在低倍镜下观察血细胞计数板的划线。 2.将少量干酵母放入0.85%NaCl溶液中,制成细胞悬液。 3.加样: 滴1滴细胞悬液在血盖片边缘的厚玻片上,因毛细管现象,细胞悬液自然流入计数室。 注意悬液注入量不要过多或过少,计数室内不应有气泡。如果不符合要求,必须重新擦片滴加。 4.计数: 加样后静置2-3分钟,待细胞在计数室中下沉后在低倍镜下进行计数。数四角大格内的细胞总数。计数时应按一定的路径,以免遗漏或重复,对压在格线上的细胞,依“数上不数下,数左不数右”的原则进行计数。然后按公式计算出每毫升溶液中的酵母细胞数。计数2次,取其平均数。 5.细胞成活率测定 滴1滴细胞悬液在载玻片的中央,再加1滴0.4%台盼蓝染液,盖上盖玻片,制成临时装片。 在低倍镜下移动载玻片,随机计数上、下、左、右、中5个视野内的细胞总数和被染色的死细胞数,计算成活率。
六 实验结果: 计算和记录细胞密度和成活率的测定结果。
七 讨论: 1.对实验结果的分析 2.实验中的注意事项和关键步骤 3.实验的体会和建议
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