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实验十三 简单染色和革兰氏染色
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发布时间：2006-12-05
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所谓简单染色就是只用一种染料染色，革兰氏染色是细菌分类上常用的鉴别染色。
一 实验目的
掌握细菌简单染色和革兰氏染色的基本技能，观察细菌的形态，掌握无菌操作和油镜的使用方法。
二 实验材料
1．菌种：枯草杆菌斜面（37℃下培养10小时左右）、大肠杆菌斜面、八叠球菌斜面。
2．染液：结晶紫染液、95%乙醇、碘液、藏花红染液、蒸馏水。
3．用具：载玻片、接种针、煤气灯、火柴、香柏油、擦镜纸、显微镜。
三 实验内容：
(一)简单染色：
1．涂片：在洗净的载波片中央滴一滴蒸馏水（水滴不可太大），通过无菌操作，用接种针挑取少量枯草杆菌于蒸馏水中，涂匀。在另一载波片中央滴一滴八叠球菌菌液。
2．固定：将涂片在火焰较高处快速通过几次，使菌体固定在载玻片上。（注意温度不可过高）
3．染色：用结晶紫染液染1分钟。
4．水洗：用水轻轻冲洗，直到流出的水无色为止。
5．干燥：微热烘干。
6．镜检：用显微镜（油镜）观察细菌的形态。（枯草杆菌呈杆状，八叠球菌呈球状）
(二) 革兰氏染色
1．涂片：在洗净的载玻片左右各加蒸馏水一滴，通过无菌操作用接种针分别挑取少量枯草杆菌和大肠杆菌于载玻片左右两滴蒸馏水中，涂匀。
2．固定：将涂片在火焰上快速通过几次。
3．染色：滴一滴结晶紫染液，染1分钟，水洗。滴加碘液，作用1分钟，水洗。
4．脱色：连续滴加95％乙醇，约半到1分钟，直到滴下的乙醇无色为止（注意必须严格掌握脱色程度），水洗。
5．复染：用藏花红染料复染1分钟，水洗，使干。
6．镜检：用油镜检查哪一种菌是革兰氏阳性菌，哪一种菌是革兰氏阴性菌（枯草杆菌呈紫色，为G+；大肠杆菌呈红色，为G－）。
附：
一．从斜面试管挑取菌种的无菌操作（图1.2）（图）
二．油镜的使用（点击展开）
三．染料配制（点击展开）
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