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PCR反应体系
文章来源: 文章作者: 发布时间:2006-11-22   字体: [ ]  
 

5.DNA 聚合酶
  ① Taq DNA 聚合酶
    来自嗜热古细菌的嗜热水生菌(Thermus aquaticus)Taq DNA 聚合酶分子量大小为 94kDa ,为单分子酶,在 75℃ 活性最强。具有 5'-3' 合成活性和 5'-3' 外切活性 , 但是无 3'-5' 外切活性。在 95℃ 的半衰期为 40 分钟。启动 PCR 反应的能力很强,聚合速度快,在 72℃ 的聚合速度为每秒 30-100 碱基。由于没有 3'-5' 外切活性,在扩增过程中有 8.9-11x10 -5 的错配几率。

  ② Tth DNA 聚合酶
    Tth DNA 聚合酶来自嗜热热细菌(Thermus thermophilus)HB8 ,由 Promega 公司开发成商品。 Tth DNA 聚合酶分子量为 94kDa ,在 74℃ 进行扩增,在 95℃ 的半衰期为 20 分钟。 在 Mg2+ 存在下,条件下以 DNA 为模板合成 DNA ,而在 MnCl2 存在下可以 RNA 为模板合成 cDNA 。因此可在高温下做 RT-PCR 、反转录和引物延伸(primer extension)反应, 避免 RNA 反转录过程中形成的二级结构。

  ③ Vent DNA 聚合酶
    Vent DNA 聚合酶是从由火山口分离的嗜热球菌 Thermococcus litoralis 中分离的第一个具有 3'-5' 外切活性的高温 DNA 聚合酶,由 New England Blabs 公司开发出商品。酶分子为 85kDa ,具有更长的半衰期,在 100℃(使用 MgSO4)时,其半衰期为 1.8 小时。

  ④ Pwo DNA 聚合酶
    Pwo DNA 聚合酶来自 Pyrococcus woesei(BM),大小为 90kDa ,由原德国宝灵曼公司开发。在 100℃ 的半衰期大于 2 小时,出错率低。是使用较多的具有 3'-5' 外切活性的且具有高保真度的 PCR 酶。

  ⑤ Pfu DNA 聚合酶
    Pfu DNA 聚合酶来自激烈热球菌(Pyrococcus fariosus),具有理想的扩增保真度,具有极高的热稳定性,是目前使用最广泛的具有 3'-5' 外切活性的 PCR 酶。

  ⑥ 商用混合酶
    为了提高扩增的保真度或扩增较长的 DNA 片段,将 Taq DNA 聚合酶的强启动能力和具有 3'-5' 外切活性的高温 DNA 聚合酶的高持续活性和校正功能结合起来,可以达到很好的效果。



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