(一)PCR-ASO斑点杂交

　　在我国人群中，目前所发现的PAH基因突变以点突变为主，因此可以此来合成相 应的突变型寡核苷酸探针.来检测PKU患者的点突变，ASO法是最为有效的点突变检测 技术.

    随着非同位素标记探针的出现及反向斑点杂交的应用，预记该方法的临床应用 将愈来愈广泛.下表训列即为利用PCR-ASO检测时所用的引物.

探针

突变位置及 性质	扩增 区域	引物	扩增 片段	突变探针
R111×(C→T)	3	F5'GTTAGGTTTTCCT GTTCTGG3'	300bp	35'GAGCTTTCATGA GATAAGA3'
		R5'CTTATGTTGCAA AATTCCTC3'		35'GAGCTTTCACGA GATAAGA3'
Y204C(A→G)	6	F5'CACAGGTTCTGG TCCCCGAC3'	354bp	65'TTGTACTCACAG CAAGCAT3'
		R5'CTCTCCTCTCCT CAATCCTC3'		65'ATGCTTGCTATGA GTACAA3'
R243Q(G→A)	7	F5'CTCCTAGTGCCT CTGACTCA3'	291bp	705'TTCCGCCTCCAA CCTGT3'
		R5'ACCAGCCAGCA AATGAACCC3'		75'TTCCGCCTCCGAC CTGT3'
W326X(G→A)	10	F5'CCCAGTCAAGG TGACACATA3'	256bp	105'ACAGTAAACTAG TAAAT3'
		R5'ACAAATAGGGTT TCAACAAT3'		105'ATTTACTGGTTTA CTGT3'
Y356X(C→A)	11	F5'TGAGAGAAGGGG CACAAATG3'	320bp	115'CTACAGTAATGC TTATC3'
		R5'GTAGACATTGAG TCCACTCT3'		115'CTACAGTACTGC TTATC3'
R413P(G→C)	12	F5'ATGCCACTGAGA ACTCTCTT3'	245bp	125'GGTCGTAGGGAA CTGAG3'
		R5'AGTCTTCGATTA CTGAGAAA3'		125'GGTCGTAGCGAA CTGAG3'

　　扩增时所用引物系根据每个外显子两侧的旁侧序列的设计.扩增片段包括完整的 外显子区域其两侧部分内含子序列.