(二)3'-碱基特异PCR，高位特异PCR

　　在以PCR为主的已知突变检测中，3'BSPCR是最简便可行的一种检测技术.在应用 时，采用正常引物和突变引物两组试验，以确定何种引物可扩增，然后电泳确定有无相应的突变.

    由个PAH各外显子间的距离较大，各自有独立的引物，因此可用多重PCR同时扩增数 个外显子.不应同时，可将正常引物编为一组，突变引物编为一组进行两组多渗PCR. 然后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物以确定突变位点.

　　表所到即为国内报道的用等位特异PCR

诊断PKU后用的相物及扩增片段，检测位置

外显子 及位置	共同引物	正常引物	突变引物	C/N	C/M
3， R111× (C→T) (CGA→ TGA)	C:5'TCTAGAC CTTCTCG-3'	N:5'-TTCTTCT TATCTCG-3'	M:5'-CTTTCTT CTTATCTCA-3'	147	148
6， Y204 (A→G) (TAT→ TGT)	C:5'-AGCCCA TCCCTCGA-3'	N:5'-ATGTGAT TGTACTCAT-3'	M:5'-AATGTGA TTGTACTCAC-3'	114	113
7， R243Q (G→A) (CGA→ CAA)	C:5'-CAGTAC TCACGGTTCG-3'	N:5'-GTTTCCGC CTCCGA-3'	M:5'-GGTTTCC GCCTCCA-3'	138	137
11， Y356X (C→A) (TAC→ TAA)	C:5'-TCTCTG CCACGTAA-3'	N:5'-TGGGGCC TACAGTAC-3'	M:5'-TGGGGCC TACAGTAA-3'	118	118
12， R413P (G→C) (CGC→ CCC)	C:5'-TACTGT TAATGGAATC-3'	N:5'-CCCTTCTC AGTTCG-3'	M:5'-CCCTTCT CAGTTCC-3'	94	94

(三)用PCR直接检测发生点突变的内切酶点

　　在PKU已检出的突变位点中，有七个位点的突变改变了限制性内切酶的识别位点. 若用该酶切位点两侧的引物扩增包括内切酶识别位点在内的DNA的酶，然后将扩增产物用内切酶溶解，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切点段，以判定个体有无该内切酶识别位点的突变，引起内切酶识别 位点改变的点突变见

基因突变类型	扩增区域	内切酶	识别位点	突变结果
F56(G→T)	2	MnⅠ	CCT(N)	消失
R111×(T→T)	3	BspHⅠ	TCATGA	出现酶切位点
		NLaⅢ	CATG
IVS4n＋(C→A)	5	MaeⅠ	CTAG	消失
		DneⅠ	CTNAG	新切点出现
G247V(G→T)	7	HaeⅢ	GGCC	消失
W326×(G→A)	10	DdeⅠ	CTNAG	出现新切点
A345T(G→A)	10	RsaⅠ	GTAC	出现新切点
Y356×(C→A)	11	RsaⅠ	GAC	消失

(四)新的突变位点的PCR筛查:

　　对于有患者，不够用上述的PCR方法检出其突变位点，则可用PCR-SSCP，PGGE、 CDGE及其它的突变位点筛查技术进行筛查，以确定检出的突弯位点与PKU的关系.