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T4 DNA连接酶
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发布时间：2007-04-07
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产品描述： T4 DNA 连接酶是从重组大肠杆菌中纯化得到的高纯度连接酶。该酶经过克隆测试。适用于平端或粘端克隆或加接头反应。该酶可共价连接双链DNA或RNA的5'磷酸和3'羟基末端。没有外切或内切酶活性。 产品用途： 限制性酶切片段的克隆。 将linker或adapters 连接到DNA片段的平滑末端。 单位定义(粘性末端活性单位）： 在20μl连接反应体系、0.12μM (300μg/ml)的5'-末端浓度条件下，16℃反应30分钟，能使50% 的经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。一个粘端连接活性单位=0.015个韦氏（ATP-PP交换）单位。一个韦氏单位=67个粘端连接活性单位。 浓度： 400,000 units/ml 质量控制检测： 本品经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接活性测定，内切核酸酶/缺刻酶测定和SDS-PAGE纯度鉴定。保证产品的质量稳定可靠。 贮存条件： 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 μg/ml BSA和50%的甘油，-20℃贮存。 热失活条件： 65℃ 加热10分钟。 使用注意： ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。 质量保证： 无核酸内、外切酶污染。每批T4 DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。 1X T4 DNA连接酶反应缓冲液： 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA, (pH 7.5 25℃)。推荐DNA浓度(0.1 - 1 μM 的5′末端)。 反应条件： 1X T4 DNA连接酶反应缓冲液，16℃温浴反应。为方便起见，连接反应也可以在室温（20-25℃）条件下进行。对于粘性末端连接，在20μl反应体系中加入1μl T4 DNA连接酶，反应10分钟。对于平滑末端连接，在20μl反应体系中加入1μl T4 DNA 连接酶反应2小时。 [生产厂家]上海欣百诺生物科技有限公司
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