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Native purification of His-tagged Proteins from Sf9 cells
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日期：2007-12-02 13:55:36
点击：40 评论：0
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| Native purification of His-tagged Proteins from Sf9 cells Native purification of His-tagged Proteins from Sf9 cells Protocol is for 150 ml of cell culture. 1. Spin down cells and wash 1X in 10 ml ice cold PBS. 2. Resuspend pellet in 20 ml lysis buff |
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一些与蛋白质方面有关的名词解析
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日期：2007-11-07 00:57:47
点击：79 评论：0
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| 1. 氨基酸（amino acid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。是蛋白质的构件分子。 2. 必需氨基酸（essential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）（赖氨酸，苏氨酸等）自己不能合成，需要从食物中获得的氨基酸。 （一家写两三本 |
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Western免疫印迹
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日期：2007-10-26 09:18:08
点击：177 评论：0
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| Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern 或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶 |
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Western bloting 综述
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日期：2007-10-26 09:16:51
点击：248 评论：0
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| 摘要： 本文主要是针对Western bloting的原理及操作进行了简单的阐述，Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应，先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来，然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（NC膜）上，然后再加抗体形成抗原抗体复合物，利用发光或显色原理 |
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Dry Transfer 干法蛋白转膜
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日期：2007-10-26 09:14:46
点击：76 评论：0
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| Dry Transfer Trans-Bot SD Assembly 1. Prepare the transfer buffer. 2. Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates the removal of electrophoresis buffer salts and detergents. The length of time requir |
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电泳和Western转印的常见问题
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日期：2007-10-26 09:14:05
点击：145 评论：0
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| 表1 Common problems for electrophoresis and western bloting 问 题 可能原因 建议解决方法 推荐电压条件下电泳时间过长。 电泳缓冲液过� � 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 推荐电压条件下电流过高，热量过大。 电泳缓冲液过� � 配制新鲜缓冲液，使用1X稀释液。 推 |
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Western 不同转膜方法的取舍
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日期：2007-10-26 09:11:54
点击：207 评论：0
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| 转膜: 小分子量的蛋白半干转效果比较好， 大分子量（100KD）以上建议湿转。 具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子湿转100V，2.5h以上应该可以，转完膜丽春红染出的条带比较清楚的话，一般都能有结果。 湿转，Buffer一定要预冷， |
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使用胶做western blot的方法
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日期：2007-10-26 09:10:57
点击：85 评论：0
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| 在经典的Western Blot的世界里，蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣，构成WB完整过程，就象砌积木一样，少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友，告诉我，你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时，有没有设想过能省略掉其 |
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Western Blot Protocol
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日期：2007-10-26 09:06:51
点击：84 评论：0
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| 一、提取抗原蛋白 将提取 RNA 途中留存的样品，加入 150μl 100% 酒精充分混匀，静置 5min(RT), 2000 × g , 4 ℃离心 5min, 吸取上清至新管中 , 加入 750μl 异丙醇 , 混匀 , 静置 10min(RT), 12000 × g, 4 ℃离心 10min, 弃上清 , 加入 1ml 0.3mol/L 盐酸胍 /95% 酒 |
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Westernblot实验步骤及注意事项
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日期：2007-10-26 09:04:24
点击：108 评论：0
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| Westernblot 实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃ 4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分 |
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免疫印迹法
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日期：2007-10-26 09:03:14
点击：126 评论：0
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| Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电 |
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Western Blot详解－主要试剂
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日期：2007-10-26 09:02:21
点击：74 评论：0
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| 主要试剂 1、丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因 |
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Western Blot详解－原理
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日期：2007-10-26 09:01:09
点击：123 评论：0
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| Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 原理 与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳， |
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western blotting的一些个人经验
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日期：2007-10-26 09:00:30
点击：82 评论：0
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| 1.用脱脂奶粉封闭的效果不一定比用BSA差,不过我们试过几种奶粉,有一些奶粉不太适合.推荐使用的奶粉:雀巢高钙奶粉,多力精低脂奶粉.一般国产的奶粉的颗粒比较大,不太容易溶解. 2.关于三名治:本人以前做时花很多时间在防止短路上,现在我做的时候根本没有剪齐,最主要的是赶 |
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western blotting操作手册
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日期：2007-10-26 08:58:40
点击：98 评论：0
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| Running Protein Gels Solutions 10X Running Buffer (0.25 M Tris, 1.92 M glycine, 1% SDS) 121 g Tris 577 g glycine 40 g SDS ddh20 to 4 L (check pH at 1:10 dilution (pH=~8.8)). 5X Sample Buffer (0.3125 M Tris pH 6.8, 10% SDS, 50% glycerol, 0.005% bromo |
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