产品组成（50次包装）

贮存温度
   室温保存（RNaseA使用前-20℃保存）
试剂准备
    1、Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入（使用前请离心），均匀混合后4℃保存并标示。
    2、Wash Buffer 使用前请加入45ml无水乙醇并标示。
    3、使用前检查各试剂是否有沉淀，若有请于37℃溶解，再恢复至室温后使用。
    4、Lysis Buffer用后盖紧瓶盖。

操作步骤
    1、收菌
    取1～5ml过夜培养的大肠杆菌菌液，13000rpm离心1分钟，弃上清。
    注意：一般高拷贝质粒用1-3ml菌液，低拷贝质粒用2-10ml菌液。若使用大体积菌液，请相应加大各溶液的体积。
    2、重悬菌液
    将250μl Resuspension Buffer(已加RNase A)加入菌液沉淀，Vortex充分悬浮细菌沉淀。
    注意：请充分重悬细菌，若不充分会导致碱裂解不完全。

 3、碱裂解
    将250μl Lysis Buffer 加入细菌重悬液，温和地上下翻转混合6～10次，使菌体充分裂解，直至溶液变得清亮。
    注意：此步请轻柔混合，剧烈混合如Vortex会导致基因组DNA断裂，从而污染质粒DNA。
    碱裂解不宜超过5分钟，否则会导致部分质粒DNA不可逆变性。
    4、中和
    加入400μl Neutralization Buffer,立即轻柔地上下翻转混合6～10次，室温放置5分钟。室温13000rpm离心10分钟。
    5、柱预处理
    将试剂盒中的Spin Column 按置于Collection Tube上，加入500μl Column Preparation Buffer, 13000rpm离心1分钟，弃去滤出液。
    注意：此步处理会优化柱结合DNA能力。
    6、柱结合
    将上述操作4的上清液转移至预处理过的Spin Column中，13000rpm离心1分钟，弃滤液。
    7、去蛋白
    将500μl的Protein Remove Buffer加入Spin Column中，13000rpm离心30-60秒，弃滤液。
    8、漂洗
    将600μl的Wash Buffer加入Spin Column中，13000rpm离心30-60秒，弃滤液。
    9、重复漂洗一次，13000rpm离心30-60秒，弃滤液。
    空柱13000rpm再离心2分钟，除去残留乙醇。
    10、洗脱
    将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入60-100μl的水或Elution Buffer，室温静置1分钟，13000rpm离心1分钟洗脱DNA，可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
    注意：Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应。把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率，如果提取的质粒>10kb，请将洗脱液预热至60℃。

质量控制
   所提取质粒DNA经紫外分光光度分析以及琼脂糖凝胶电泳鉴定质量：3ml过夜培养的大肠杆菌（含pEYFP-c1质粒）按照标准方法抽提质粒，100μl洗脱，取1μl电泳，所得质粒浓度分别为275μg/ml和290μg/ml，OD260/280为1.886和1.895。

规 格 单 价 50次 350元 100次 580元

产品仅用于科研。请勿用于人及动物的治疗，临床诊断，或作为食品，化妆品，家庭用品的添加剂等用途。